돼지수의사회 연례세미나

PRRS 안정화 확인을 위한 혈청과 대안 가검물의 진단 효율 평가

거세액·구강액으로 채혈을 대신할 수 있을까?

유니동물병원 김정희

혈청Serum

거세액Processing fluid

구강액Oral fluid

배경

안정화 판정은 반복 검사가 필요하지만, 채혈은 현장 부담이 크다

PRRS 안정화(Stability)란

바이러스 순환이 멈추고, 이유 시 PRRSV 음성 자돈이 지속적으로 생산되는 단계

관리·근절 프로그램의 성패를 판단하는 핵심 과정
배치마다, 수개월에 걸쳐 반복 확인해야 함
그래서 ‘쉽게, 자주’ 채취할 수 있는 가검물이 필요

개체 채혈의 현장 부담

보정 인력

두당 보정·채혈에 숙련 인력이 필요

돼지 스트레스

보정 과정에서 스트레스·부상 위험

노동력·비용

회당 수십 두 채혈, 반복 시 부담 누적

개체 단위 한계

소수 표본으로 집단 상태를 추정

가검물 비교

세 가지 가검물: 무엇을, 어떻게, 어느 단위로

혈청 Serum

채취: 보정 후 경정맥 채혈
단위: 개체 단위
적용: 전 단계 (기준 검사)
검사: RT-qPCR · ELISA

가장 확립된 방법이지만 노동·스트레스 부담

거세액 Processing fluid

채취: 거세·단미 시 나오는 조직·삼출액 수거
단위: 복(litter) → 배치 단위
적용: 분만사 · 이유 전 자돈
검사: RT-qPCR

추가 보정 없이 수직감염 여부 확인

구강액 Oral fluid

채취: 면 로프를 걸어 두고 씹은 타액 회수
단위: 돈방 단위
적용: 자돈사 · 육성 · 비육
검사: RT-qPCR · ELISA

보정 없이 돈방 전체를 한 번에 확인

연구 설계

PRRS 발생 농장에서 확진 후 약 300일 추적

대상 농장 · 번식–자돈 농장 (PRRS 발생)

0두

모돈 규모

2019.4

PRRS 확진

약 0일

추적 기간

1

이유 전 자돈

거세액vs혈청

PRRSV RT-qPCR

안정화 도달 시간(Time to stability, TTS) 평가

2

자돈사 돼지 (4·8주령)

구강액vs혈청

PRRSV RT-qPCR + ELISA

바이러스학적·면역학적 반응 비교

샘플링

같은 배치를 서로 다른 가검물로 동시에 추적

점 = 채취 시점 (점에 마우스를 대면 날짜 표시) · 구강액은 자돈사 입식 이후 시점 기준의 개략 배치

이유 전 자돈 혈청

복당 저체중·허약 자돈 1두, 가급적 1~2산 모돈의 자돈에서 선발 (30두, 5두씩 풀링)

자돈사 구강액 · 혈청

4주령(입식)·8주령, 돈사당 4돈방(돈방당 50~60두) · 돈방당 구강액 1점 + 혈청 5점 · 채취 즉시 냉장, 24시간 내 의뢰

구강액 채취 방법

구강액 채취는 로프 하나면 충분하다

01 로프 준비40 cm 면 로프

02 걸어 두기돼지 어깨 높이로 매달기

03 45분 대기돈방 돼지들이 자유롭게 씹음

04 압착·회수로프를 짜서 50 mL 튜브에

05 냉장 운송24시간 이내 검사 의뢰

현장 포인트

보정·채혈 없이 돈방 단위 집단 시료를 얻을 수 있음
로프를 씹는 돼지는 30분에 약 80% 수준 (Seddon et al., 2012) → 충분한 시간 확보

01

RESULT 01

거세액 vs 혈청

이유 전 자돈 · PRRSV RT-qPCR · 안정화 도달 시간(TTS)

거세액혈청

배치별 RT-qPCR 결과

거세액은 혈청과 같은 흐름을 보이며 더 일찍 음성으로 전환

양성 음성 (Ct >35) 점선: 지속 음성 시작 시점 · 혈청은 2배치 간격, 30두를 5두씩 풀링한 6점 중 양성 비율(%) · 세로줄에 마우스를 대면 강조

거세액: 2-2G(8월 중순)부터 음성 전환, 2-6G에서 1회 산발 양성 후 계속 음성

혈청: 양성률 100% → 33%로 감소, 2-5G(9월 말)부터 계속 음성

바이러스 역가 · 양성률

역가와 양성률 모두 감소했고, 거세액이 혈청보다 먼저 음성 도달

혈청 역가거세액 역가혈청 양성률거세액 양성률

선: 평균 바이러스 역가 (log₁₀ TCID₅₀/mL) · 막대: PCR 양성률 (%) · 역가는 원 그래프 판독 근사값

음성 전환 시점 (24일 간격 배치)

0번째

거세액

0번째

혈청

약 0주

거세액이 앞섬

배치 이후 음성 · 2-2G(8.12) vs 2-5G(9.17)

거세액

2-2G(8월 중순)부터 음성 전환, 2-6G에서 1회 산발 양성 후 계속 음성

혈청

양성률 100% → 33%로 감소, 2-5G(9월 말)부터 계속 음성

두 가검물 간 역가 차이없음p = 0.5648

혈청 대비 거세액 RT-qPCR 진단 성능

거세액은 혈청과 ‘거의 완전한’ 일치도를 보임 (κ = 0.847)

0%

민감도

0%

특이도

0%

일치도

0

Kappa 계수 95% CI 0.562–1.000

시작종료바이러스 역가 감소 (log₁₀ TCID₅₀/mL)

거세 시 얻는 거세액은 배치 단위 PRRSV 상태 확인에 정확하고 실용적인 채혈 대안 (Lopez et al., 2018과 일치)

→ 분만사 수직감염 · 안정화(TTS) 모니터링

02

RESULT 02

구강액 vs 혈청 : RT-qPCR

자돈사 4주령·8주령 · 돈방 단위 비교 (총 72개 돈방)

구강액혈청

구강액 RT-qPCR

구강액 PCR은 특이도 100%, 민감도는 감염 돈방이 많을수록 높음

혈청구강액PCR 양성 돈방 비율 (%)

0%

특이도

0%

상대 민감도

주령별 민감도

4주령 40.0%

8주령 72.2%

일치도 84.7%, κ = 0.654 (95% CI 0.477–0.830)
돈방별 Ct 상관 r = 0.7184 (p < 0.0001)
16번째 배치 이후 두 가검물 모두 음성 유지

돈방별 결과

돈방별로 보면, 구강액은 혈청 양성 돈방이 많은 8주령에서 잘 검출

칸 = 돈방(1~4) · 숫자 = Ct 값 (색이 진할수록 Ct 낮음) · 혈청은 돈방당 5두 풀링 · 점선 = 2-8G 4주령 구강액 미채취
칸에 마우스를 대면 같은 돈방의 혈청·구강액 결과가 함께 강조됩니다

4주령 혈청 양성 10 · 구강액 양성 4돈방 8주령 혈청 양성 18 · 구강액 양성 13돈방

배치별 추이

혈청 역가가 높은 시기에 구강액도 함께 양성으로 검출

혈청 역가구강액 역가혈청 양성 돈방(%)구강액 양성 돈방(%)

4주령 (자돈사 입식)

8주령

8주령 혈청 평균 역가가 구강액보다 유의하게 높음 (4주령 OF 대비 p = 0.0251, 8주령 OF 대비 p = 0.0282) · 돈방별 상관 r = 0.7184 (p < 0.0001) 역가는 원 그래프 판독 근사값

03

RESULT 03

구강액 vs 혈청 : ELISA 항체

돈방 단위 양성률 · S/P ratio 변화 양상

구강액혈청

구강액 ELISA

구강액 ELISA는 혈청 양성 돈방을 하나도 놓치지 않았다 (민감도 100%)

혈청구강액ELISA 양성 돈방 비율 (%)

혈청 5점 중 1점 이상 양성 = 양성 돈방

0%

상대 민감도

0%

상대 특이도

일치도 88.9%, κ = 0.609 (95% CI 0.373–0.844)
개체 혈청 360점 중 166점(46.1%) 양성

8개 돈방(4주령 2, 8주령 6)은 구강액 양성이지만 개체 혈청은 모두 음성

돈방별 S/P

구강액과 혈청은 유의한 양의 상관을 보임 (r = 0.612)

돈방Y = 1.395X + 1.563r = 0.612, p < 0.0001

점 위치는 원 그래프에서 판독한 근사값

상관은 있지만 값은 다르다

구강액 S/P가 혈청보다 높게 나와, 구강액 값으로 혈청 S/P를 예측하기는 어려움

음성 농장에서도

0

구강액 ± 0.085

0

혈청 ± 0.019

p < 0.0001, IDEXX 2013과 일치

→ 구강액 S/P는 따로 해석 기준을 둔다

배치별 ELISA

구강액 S/P가 더 높지만 혈청과 같은 방향으로 움직임

혈청 평균 S/P구강액 평균 S/P혈청 양성 돈방(%)구강액 양성 돈방(%)

4주령 (자돈사 입식)

8주령

구강액 S/P가 유의하게 높음 (4주령 p < 0.0001, 8주령 p = 0.0037) S/P는 원 그래프 판독 근사값

민감도 · 특이도 읽기

돈방에 혈청 양성 돼지가 한 마리만 있어도 구강액 ELISA는 양성

가로: 돈방 내 혈청 양성 돼지 비율 (5두 중)세로: 구강액 양성 비율 (%)

민감도 100%의 의미

돈방 혈청 5두 중 1두(20%)만 양성이어도 구강액은 모두 양성

특이도 50%의 의미

혈청이 모두 음성인 16개 돈방 중 8개에서 구강액 양성

평균 S/P 혈청 0.105 · 구강액 0.788

→ 구강액 ELISA 양성은 혈청으로 확인

결과 해석

대안 가검물은 ‘결과를 읽는 법’만 알면 충분히 쓸 수 있다

구강액 PCR 음성은 신중하게

돈방 내 양성 개체가 적으면 민감도 감소 (Olsen et al., 2013)
로프 접촉 돼지 약 80%, 타액 희석 (Seddon et al., 2012)
돈방 혈청 양성률 30% 이상이면 검출률 ~100% (De Regge & Cay, 2016)

→ 유병률 낮은 시기: 채취 돈방 수·빈도를 늘린다

구강액 ELISA 양성은 확인 검사

민감도 100% → 집단 스크리닝에 유리
특이도 50% → 위양성 가능성
구강액 S/P가 원래 높게 나옴 (IDEXX, 2013)

→ 양성 돈방은 혈청 검사로 확인한다

현장 적용

단계별로 가검물을 나눠 쓰는 모니터링 전략

이유 전 자돈

분만사

거세액

매 배치 거세·단미 시 수거

수직감염 확인, 안정화(TTS) 판정

→

4·8주령

자돈사

구강액

돈방 단위 로프 채취 (PCR·ELISA)

수평 순환 모니터링

→

확장 적용

육성·비육사

구강액

같은 방식으로 정기 채취

농장 전체 순환 여부 확인

* 본 연구의 구강액 검증은 자돈사(4·8주령)까지 · 육성·비육 적용은 같은 원리의 확장

혈청은 ‘확인 검사’로 — 구강액 ELISA 양성 돈방, 안정화 최종 판정 등 꼭 필요한 시점에만 선별 채혈

결론

덜 잡고, 더 자주 보는 PRRS 안정화 판정

01

거세액은 혈청과 높은 일치도(κ = 0.847)를 보였고 더 일찍 음성 전환되었다 — 분만사 안정화(TTS) 확인의 채혈 대안

02

구강액 PCR은 특이도 100%로 양성이면 확실, 음성은 유병률이 낮을 때 신중히 해석 — 돈방 수·빈도 확대

03

구강액 ELISA는 민감도 100%의 집단 스크리닝 도구 — 양성은 혈청으로 확인

각 가검물의 특성을 이해하고 혈청과 병행하면, 덜 잡고 더 자주 보는 PRRS 안정화 판정이 가능하다

Q&A

감사합니다

유니동물병원 김정희 · pigdoctor@kakao.com